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Quick Blunting Kit

 
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运费与支付说明:

1.含干冰类产品有运费;

2. 必须现金付款或有信用额度的会员才可以直接发货,否则需要等待现金付款信息。

描述:

特性:

■ 将限制性内切酶消化后的 DNA 末端平齐化,仅需不到 30 分钟

■  使用即用型预混液在室温即可进行反应

■  适用于限制性内切酶消化后的 DNA,已剪切或雾化的 DNA 或 PCR 产物

 

概述:快速末端平齐化试剂盒用于将 DNA 不匹配的 5'  或 3'  突出末端转变为带有 5'  磷酸的平齐末端,以便有效地与平齐末端 DNA 克隆载体连接。酶混合液中的 T4 DNA 聚合酶(NEB #M0203)能使 DNA 末端平齐化,该酶同时具有 3' →5' 外切酶活性和 5'→3' 聚合酶活性。酶混合液中的另一成份是 T4 多聚核苷酸激酶(NEB #M0201),可将平齐末端 DNA 的5' 端磷酸化,以用于与克隆载体的连接反应。本试剂盒经过优化,可在单次反应中将 5 μg 的 DNA 末端平齐化。

 

应用:

• 已剪切 DNA、与雾化 DNA 以及经限制性内切酶消化的 DNA 进行末端平滑化,便于与质粒、粘粒、fos-mid 和 BAC 载体连接。
• PCR 产物在进行平末端克隆前进行末端平齐化。

 

试剂盒的组成:

■  平滑化混合液
■  10X Blunting Buffer
■  1 mM dNTP Mix

 

质保声明:

用 ApaI 和 BamHI 消化 pUC19,产生 5' 和 3' 末端突出 DNA 片段。使用上述片段检测该试剂盒平齐化突出 DNA 末端的能力。将此 DNA 的末端平齐化、连接,并转化到 NEB 的 5-α 感受态细胞(NEB #C2991),涂布于含 X-gal、IPTG 和氨苄的平板上。蓝色克隆显示质粒 DNA 的 5' 突出末端以被补平,3' 突出末端已被移除。

 

热失活:70°C 10 分钟。

 

 


注意事项:

PCR 产物在进行末端平滑化之前必须纯化,可采用商业纯化试剂盒、酚抽提/乙醇沉淀法或者凝胶电泳的方法纯化 DNA。经限制性内切酶消化的 DNA 可无需纯化直接进行末端平滑化反应。末端平齐化酶混合液在 Blunting Buffer 中有最适活性,但在添加了 dNTPs 和 DTT 后,在 NEBuffers 1, 2, 3, 4 以及 EcoRI  和 DpnII 的特殊缓冲液中也具有活性。但在这些缓冲液中,连接的保真度有轻微下降。在 NEBuffer 1 中,转化效率降低,为最佳效率的 50%。


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参考文献

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