Quick Blunting Kit

• 产品编号：E1201L      品牌：New England Biolabs       原厂货号：E1201L
• 产品分类：克隆 > 克隆载体和克隆试剂盒 > 依赖DNA连接酶的克隆试剂盒
• 应用分类：

描述：

特性：

■ 将限制性内切酶消化后的 DNA 末端平齐化，仅需不到 30 分钟

■  使用即用型预混液在室温即可进行反应

■  适用于限制性内切酶消化后的 DNA，已剪切或雾化的 DNA 或 PCR 产物

概述：快速末端平齐化试剂盒用于将 DNA 不匹配的 5'  或 3'  突出末端转变为带有 5'  磷酸的平齐末端，以便有效地与平齐末端 DNA 克隆载体连接。酶混合液中的 T4 DNA 聚合酶（NEB #M0203）能使 DNA 末端平齐化，该酶同时具有 3' →5' 外切酶活性和 5'→3' 聚合酶活性。酶混合液中的另一成份是 T4 多聚核苷酸激酶（NEB #M0201），可将平齐末端 DNA 的5' 端磷酸化，以用于与克隆载体的连接反应。本试剂盒经过优化，可在单次反应中将 5 μg 的 DNA 末端平齐化。

应用：

• 已剪切 DNA、与雾化 DNA 以及经限制性内切酶消化的 DNA 进行末端平滑化，便于与质粒、粘粒、fos-mid 和 BAC 载体连接。
• PCR 产物在进行平末端克隆前进行末端平齐化。

试剂盒的组成：

■  平滑化混合液
■  10X Blunting Buffer
■  1 mM dNTP Mix

质保声明：

用 ApaI 和 BamHI 消化 pUC19，产生 5' 和 3' 末端突出 DNA 片段。使用上述片段检测该试剂盒平齐化突出 DNA 末端的能力。将此 DNA 的末端平齐化、连接，并转化到 NEB 的 5-α 感受态细胞（NEB #C2991），涂布于含 X-gal、IPTG 和氨苄的平板上。蓝色克隆显示质粒 DNA 的 5' 突出末端以被补平，3' 突出末端已被移除。

热失活：70°C 10 分钟。

原厂资料：

注意事项：

PCR 产物在进行末端平滑化之前必须纯化，可采用商业纯化试剂盒、酚抽提/乙醇沉淀法或者凝胶电泳的方法纯化 DNA。经限制性内切酶消化的 DNA 可无需纯化直接进行末端平滑化反应。末端平齐化酶混合液在 Blunting Buffer 中有最适活性,但在添加了 dNTPs 和 DTT 后，在 NEBuffers 1, 2, 3, 4 以及 EcoRI  和 DpnII 的特殊缓冲液中也具有活性。但在这些缓冲液中，连接的保真度有轻微下降。在 NEBuffer 1 中，转化效率降低，为最佳效率的 50%。