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描述:
性能
使用RNeasy FFPE Kit从固定和包埋的样本中纯化获得的RNA的产量比用其他方法更高(参见Greater yields of RNA)。回收得到的完整RNA最小可达70 nt,并且几乎没有基因组DNA的污染(参见Recovery of all usable RNA)。用该试剂盒从FFPE样本中纯化得到的RNA片段非常适用于real-time RT-PCR等敏感的下游应用(参见Reliable results in real-time RT-PCR analysis和Successful real-time RT-PCR analysis)。
原理
用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联,这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放,并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA,使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。
操作流程
整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成(参见RNeasy FFPE procedure)。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后,样本在80ºC下孵育15分钟。之后,用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA,包括小的DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA,洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。
应用
RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA,得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是,从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化,不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰(例如在RT-PCR时设计小的扩增子)。进行cDNA合成时,不能使用oligo-dT引物,而要使用随机或基因特异性引物。
Feature
Specifications
Applications
PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume
14–30 µl
Format
Spin column
Main sample type
FFPE tissue samples
Processing
Manual (centrifugation), automated (QIAcube)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein
RNA
Sample amount
1*5 µm to 4*10µm sections
Technology
Silica technology
Time per run or per prep
70 minutes
Yield
Varies
原厂资料:
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说明书
参考文献
本产品可用于的实验
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