Antarctic Phosphatase

• 产品编号：M0289V      品牌：New England Biolabs       原厂货号：M0289V
• 产品分类：克隆 > DNA/RNA修饰酶 > 其他酶及抑制剂
• 应用分类：

描述：

特性

■  除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5' 末端的磷酸基团

■  防止克隆载体的自连接

■  蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化

■  为 5' 末端标记准备模板

■  去除 PCR 产物中的 dNTP 和焦磷酸盐

■  65℃ 加热 5 分钟可使酶完全失活

概述

热敏磷酸酶能催化除去 DNA 或 RNA 末端的 5′ 磷酸基团。由于磷酸酶处理后的 DNA 片段缺少连接酶所要求的 5′ 磷酸末端，因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

来源

 克隆有 TAB5 AP 基因的 E. coli 菌株，该基因最初克隆于质粒 pNI 中，后来重新克隆于质粒 pEGTAB7-4.1 中。

磷酸酶热失活：在标准反应条件下，加入 10 单位的酶和 DNA，去磷酸化 30 分钟，然后在 65 ℃ 加热。残留的磷酸酶活性用对硝基苯磷酸盐（pNPP）检测。

反应条件

1X 热敏磷酸酶反应缓冲液 [50 mM Bis Tris-丙烷 HCl，1 mM MgCl₂，0.1 mM ZnCl₂ (pH 6.0 @25°C)]。

37℃ 温育。

如果反应在 NEBuffer1,2,3,4 或特有 Buffer (如：EcoRI Buffer) 中进行，必须在反应体系中补加热敏磷酸酶反应缓冲液至 1X 终浓度。

质保声明

热敏磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下，30 分钟能使1 μg 经 HindIII (产生 5' 突出末端) 、EcoRV (产生平齐末端) 或 PstI (产生 5' 凹陷末端) 消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 > 95% 的 DNA 再环化 (通过转化 E. coli 细胞来检测)

浓度

5,000 units/ml。

热失活

65°C 5分钟。

原厂资料：