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POL II MIR RNAI GFP VECTOR 20 RXNS

 
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描述:

带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP) 将传统 RNAi 载体的优点(表达稳定并能够使用病毒导入)以及组织特异性表达和同一转录本多靶点抑制的功能集于一身。 带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP) 含有的 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体设计用于表达人工 miRNA,该 miRNA 经工程化改造,与目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶标分子的切割。 该载体包括内源性 miRNA 的侧翼序列和环序列,内源性 miRNA 可指导从较长的 Pol II 转录本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 Invitrogen 一流的 BLOCK-iT™ RNAi Designer,超过 70% 的重组体能产生超过 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表达可实现:
o 在 CMV 即刻早期启动子作用下高效表达,可通过 MultiSite Gateway® 重组选择组织特异性启动子和其它受调控的启动子
o 在 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体中同-顺反子表达 Emerald GFP (EmGFP) 报告基因,使 EmGFP 的表达与目的 miRNA 抑制活性之间具有极强的相关性
o 与用于基因表达的多种 Invitrogen Gateway® 目的 (DEST) 载体兼容;包括用于稳定转导分裂细胞、非分裂细胞和原代细胞类型的慢病毒载体,用于染色体单位点整合的 Flp-In™ 系统,以及替代报告基因融合构建体
o 可在同一转录本表达的工程化 miRNA 多于一种,从而可同时抑制多个基因并产生合成表型
工作原理
为了能高水平表达 miR RNAi 序列,pcDNA™6.2-GW/miR 载体含有 CMV 启动子(图 1)。 只需在免费的在线 BLOCK-iT™ RNAi Designer 中输入 RefSeq 注册号或核苷酸序列,该软件就会设计与目的基因具有 100% 同源性的优化 miRNA。 采用快速连接实验方案克隆 miRNA 并进行转染,可立即表达 miRNA。 所表达的 miRNA 在核内经内源细胞机制(包括 Drosha 酶)加工后,转运至细胞质,由 Dicer 酶进一步加工(图 2)。 然后,完成加工的 miRNA 结合到 RISC,在此处其功能类似于 siRNA,使 mRNA 靶标被切割。
miRNA 表达盒(含有 EmGFP)、miR 侧翼区及与目的基因同源的 miRNA 可轻松转移到各种 DEST 载体中,因而可以通过多种方式进行表达。 具体机制是:通过 Gateway® 重组反应将 miRNA 表达盒转移到 pDONR™ 载体(BP 反应),再转移到所选的 DEST 载体(LR 反应)。


注意事项:

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
 


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