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XBAI, HC

 
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描述:

限制酶反应条件

具有100%活性的推荐缓冲液 优化的反应温度 Enzyme activity in Thermo Scientific buffers, % Tango™ 缓冲液 : 双酶切
B (蓝色)
1X
G (绿色)
1X
O (橙色)
1X
R (红色)
1X
Tango™ (黄色)
1X / 2X
Tango™ 37°C 50-100 50-100 20-50 0-20 100 50-100 1X or 2X
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液Tango™:
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。


 

保存缓冲液
XbaI保存在:
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 7 mM 2-mercaptoethanol, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。


 

连接和重新酶切
50倍XbaI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。


 

琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。


 

商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。


 

双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。


 

兼容性末端
BcuI, Eco130I, NheI, XmaJI。


 

甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。


甲基化类型 序列 切割效果
Dam (GATC)

5'...TCTAGm6A TC...3'
3'...AGATC Tm6AG...5'

阻止酶切

识别位点靠近PCR片段末端时的酶切效率

识别位点距离片段末端的碱基数
1 2 3 4 5
20-50 50-100

DNA 分子中识别位点的数量

Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
1 0 1 0 1 1
pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
1 1 1 1 0 1


注意事项:

  • 底物为λ DNA (dam-) (#SD0021)。
  • 重叠的Dam甲基化抑制XbaI酶切。为了避免Dam甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm-菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。


 


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参考文献

本产品可用于的实验

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