使用传统方法进行细胞收集和RNA分离时,RNA酶解会导致很多转录体的减少或丢失。这种减少在细菌mRNA分子中尤其明显,因为它们通常只有几分钟的半衰期。此外,在操作处理细菌样本过程中,一些基因会被诱导,导致部分基因的高表达。使用RNAprotect Bacteria Reagent可以在分离RNA之前迅速稳定RNA(参见RNAprotect Bacteria Reagent prevents mRNA degradation和Accurate gene expression profiles)。E. coli(6 x 108个细胞)的RNA产量是100 µg,Bacillus subtilis(1 x 108个细胞) 的RNA产量是15 µg。用此试剂盒纯化得到的RNA品质高,其A260/A280比值为1.9–2.1(测于10 mM Tris·Cl、pH 7.5)。
原理
RNeasy Protect Bacteria Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案,在一个试剂盒中完成从样品收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与用于稳定RNA的RNAprotect Bacteria Reagent相结合,可纯化得到高品质、完整的RNA。这个过程有效地保护了样品收集过程中的细菌表达谱,确保可靠的基因表达分析结果。样本稳定后,RNeasy技术整合了异硫氰酸胍裂解的严谨性和硅胶膜纯化的纯度及速度,过程更加简洁(参见RNeasy Mini spin column)。
操作流程
在RNA分离前,直接向1体积的细菌培养基(≤7.5 x 108个细菌)中加入2体积的RNAprotect Bacteria Reagent,可立即稳定RNA(参见RNAprotect Bacteria Reagent procedure)。对样本的稳定使细菌的高效裂解有多种可选的实验方案:酶裂解、机械破碎或两种方法结合使用。我们推荐使用TissueLyser II进行高效的机械破碎。然后将乙醇加入裂解液中以提供理想的结合条件。裂解液加到RNeasy硅胶膜上(结合能力达100 µg RNA)。RNA结合到膜上后,所有污染物被高效洗去。可用30–100 µl水洗脱得到浓缩的纯RNA。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动化。
使用RNeasy Protect Bacteria Mini Kit纯化的RNA非常适用于多种应用。下游应用包括:
Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
终点法RT-PCR
定量real-time RT-PCR
芯片分析
Feature
Specifications
Applications
PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume
30–100 µl
Format
Spin column
Main sample type
Bacteria
Processing
Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein
RNA
Sample amount
15 –100 µg
Stabilization
Yes
Technology
Silica technology
Time per run or per prep
20 minutes
Yield
8–70 µg
原厂资料:
性能
使用传统方法进行细胞收集和RNA分离时,RNA酶解会导致很多转录体的减少或丢失。这种减少在细菌mRNA分子中尤其明显,因为它们通常只有几分钟的半衰期。此外,在操作处理细菌样本过程中,一些基因会被诱导,导致部分基因的高表达。使用RNAprotect Bacteria Reagent可以在分离RNA之前迅速稳定RNA(参见RNAprotect Bacteria Reagent prevents mRNA degradation和Accurate gene expression profiles)。E. coli(6 x 108个细胞)的RNA产量是100 µg,Bacillus subtilis(1 x 108个细胞) 的RNA产量是15 µg。用此试剂盒纯化得到的RNA品质高,其A260/A280比值为1.9–2.1(测于10 mM Tris·Cl、pH 7.5)。
原理
RNeasy Protect Bacteria Mini Kit提供RNA保护和分离的完整解决方案,在一个试剂盒中完成从样品收集到RNA纯化的整个过程。经验证的RNeasy硅胶膜技术与用于稳定RNA的RNAprotect Bacteria Reagent相结合,可纯化得到高品质、完整的RNA。这个过程有效地保护了样品收集过程中的细菌表达谱,确保可靠的基因表达分析结果。样本稳定后,RNeasy技术整合了异硫氰酸胍裂解的严谨性和硅胶膜纯化的纯度及速度,过程更加简洁(参见RNeasy Mini spin column)。
操作流程
在RNA分离前,直接向1体积的细菌培养基(≤7.5 x 108个细菌)中加入2体积的RNAprotect Bacteria Reagent,可立即稳定RNA(参见RNAprotect Bacteria Reagent procedure)。对样本的稳定使细菌的高效裂解有多种可选的实验方案:酶裂解、机械破碎或两种方法结合使用。我们推荐使用TissueLyser II进行高效的机械破碎。然后将乙醇加入裂解液中以提供理想的结合条件。裂解液加到RNeasy硅胶膜上(结合能力达100 µg RNA)。RNA结合到膜上后,所有污染物被高效洗去。可用30–100 µl水洗脱得到浓缩的纯RNA。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动化。