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描述:
特性
■ 测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态 ■ 测定胞嘧啶甲基化的 DNA
概述
McrBC 是一种核酸内切酶,能够切割含有甲基胞嘧啶*的单链或双链 DNA。对未甲基化的 DNA 不起作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A) mC 形式的半位点组成,这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb,但是最佳的距离为 55–103 bp。McrBC 的切割需要 GTP,但是在存在不可水解的 GTP 的类似物时,该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上,但不能进行切割。McrBC 作用于一对 PumCG 序列元件,以此检测高比例甲基化的 CpGs,但是 McrBC 不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点 (CCGG) 。
*5-甲基胞嘧啶,5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。
来源
两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB 和 McrC 质粒的大肠杆菌 K-12 菌株。
反应条件
NEBuffer 2 + BSA + GTP。37℃ 温育。
随酶提供的试剂
10X NEBuffer 2 100X BSA 100X GTP (100 mM) 对照质粒 DNA
质保声明
无核酸内切及外切酶污染。
单位定义
1 单位指在 50 μl 反应体系中,37℃ 1 小时切割含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。切割基因组 DNA 时,建议对 McrBC 进行试验性梯度测定。
浓度
10,000 units/ml。
热失活
65℃ 20 分钟。
原厂资料:
注意事项:
McrBC 在每对半位点之间切割一次,切割位点靠近某一个半位点,但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此,当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时 (例如胞嘧啶甲基化基因组 DNA) ,识别序列的可变性导致位点重叠,产生弥散状而不是细窄的条带。
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说明书
参考文献
本产品可用于的实验
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