T4 DNA Ligase

• 产品编号：M0202S      品牌：New England Biolabs       原厂货号：M0202S
• 产品分类：克隆 > 限制性内切酶和连接酶 > 连接酶
• 应用分类：

描述：

特性：

■  高反应效率
■  粘性末端和平齐末端均可连接
■  限制性酶切片段的克隆
■  将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端

■  室温或 16℃ 均有活性

概述;该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻（1） 。

来源：纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8（2） 。

反应条件：1 X  T4  DNA  连接酶缓冲液 [ 50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25 ℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推荐 DNA 5' 末端浓度为 0.1－1.0 μM。16℃ 温育。

单位定义：1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16 ℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的 λDNA 片段 [5' 端浓度为 0.12 μM （300 μg/ml）] 连接所需的酶量。

浓度; 400,000 units/ml。

热失活;65°C 10分钟。

室温连接反应：为方便起见，连接反应可以在室温 （20-25 ℃） 条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA  连接酶，反应 10  分钟。平齐末端连接：在 20 μl  反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶反应 2 小时，或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA  连接酶反应 10 分钟。

原厂资料：

注意事项：

与大肠杆菌 DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应保存于 -20 ℃，50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）。如稀释后马上使用，则可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液

（NEBuffer-s）或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。