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PENTR/D-TOPO CLONING KIT 20 REACTIONS

 
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运费与支付说明:

1.含干冰类产品有运费;

2. 必须现金付款或有信用额度的会员才可以直接发货,否则需要等待现金付款信息。

其它组分:

pENTR™ TOPO® vector,TOPO®-adapted【子货号:450218,包装:20 μl,,运保温度:-20°C】


描述:

Invitrogen 的pENTR™⁄D-TOPO® 克隆试剂盒采用高效的5分钟克隆策略("TOPO® Cloning") ,能够将平端PCR产物能以定向插入Gateway® 系统或多位点Gateway® 系统,平端PCR克隆产物的定向插入率超过90%,无需连接酶,PCR后处理或者限制性酶。这一试剂盒包括了筛选PCR目标扩增基因所需的一切试剂。

 

  • Gateway® 系统 Ready — 可在多个载体系统中快速构建克隆基因
  • 快速简便 — 从PCR到Gateway®,克隆插入仅需3步,最少仅需5分钟
  • 高效 — 定向插入的正确克隆超过90%
  • 成熟可靠 — 十余年的优异表现

pENTR™⁄D-TOPO® 克隆试剂盒综述

载体

pENTR™⁄D-TOPO® 载体 确保克隆能定向性插入Gateway 系统

克隆方法

定向 TOPO®克隆 在拓扑异构酶作用下,在5分钟内将高保真聚合酶扩增的PCR平端产物定向连接到载体中

感受态细胞

两种选择 选择高效的试剂盒,或者生长迅速的感受态细胞

简便地插入Gateway® 系统
插入Gateway®系统,只需扩增您的目标基因,之后将PCR产物直接加入到试剂盒中提供的具有拓扑异构酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®载体中,孵育5分钟,然后转化试剂盒中提供的感受态 大肠杆菌 细胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地与Gateway®目标载体进行重组。

优化的pENTR™⁄D-TOPO® 载体
pENTR™⁄D-TOPO®载体(图1)包括M13和T7引物测序位点,以及PCR产物插入位点侧翼的attL重组位点。这使得克隆的测序验证以及与您选择的含attR Gateway®目标载体进行重组变得简单。卡那霉素抗性基因以及pUC启动子可用于筛选和在大肠杆菌中进行高拷贝扩增。

简化的定向克隆
使用TOPO®定向克隆技术,您不再需要PCR纯化,载体制备,或者其他耗时的DNA操作步骤。只需要直接将您的PCR反应产物加入到提供的含拓扑异构酶的载体中,孵育5分钟,然后进行转化,就可获得90%以上正确插入的克隆。载体中的4个碱基,与您在PCR反应中使用的正向引物中预先设计的4个碱基进行配对,保证了拓扑异构酶催化的连接反应的定向性(图2)。

Gateway®重组克隆技术的优势
Gateway®重组克隆技术克服了限制性酶催化克隆的局限性,使您能在短短1个小时内将产物插入任何表达系统中,效率高达99%,而且Gateway® 重组反应是可逆的。这使得能在不同载体中转移同一序列的DNA,无需使用限制性酶,连接酶,亚克隆步骤,筛选大量克隆,或者重新测序,帮助您节约时间和金钱,降低工作量。

领先的克隆技术
当其应用于克隆时,TOPO®技术和Gateway®重组克隆技术就成为大多数科研人员的可靠助手。


注意事项:

pENTR™⁄D-TOPO® Cloning Kit contains pENTR⁄D-TOPO® vector, dNTPs, salt solution, sterile water, universal M13 sequencing primers, OneShot® TOP10 Chemically E. coli, S.O.C. Medium, and a pUC19 control plasmid. Store Competent E. coli at -80°C. Store all other components at -20°C.


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说明书

参考文献

本产品可用于的实验

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