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注意事项:
1. 连接使用的PCR片段3' 端应带有A末端,如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端
的平末端片段,可选用pLB零背景快速克隆试剂盒(VT205/206)或pGM-T平末端连接试
剂盒(VT402)进行连接反应。
2. 转化过程中使用Control Insert DNA做对照是非常必要的,在实验出现问题时可以确定原
因。
3. 建议留下部分连接产物,在出现问题后能迅速的补救,减少不必要的重复实验。
4. 涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂
布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的
克隆较少,可通过离心(4000 rpm,2 min)后吸除部分培养液,留下适量的培养基悬浮
菌体后将其涂布于一个平板中(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数
过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)。
说明书
参考文献
本产品可用于的实验
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