pGM-T Fast 克隆试剂盒

• 产品编号：TG-VT207-02      品牌：TIANGEN天根生化       原厂货号：VT207-02
• 产品分类：
• 应用分类：

描述：

pGM-T Fast Vector 是基于pGM-T Vector改良的一种高效克隆PCR产物的专用载体，经由克隆质粒在XcmI内切酶酶切后得到的带3’ T突出末端的线性化载体，通过该方法产生的带有3’ T突出末端的线性化载体效率远高于传统酶切加尾法。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pGM Simple -T Fast Vector 3’端的T互补连接。此外，pGM-Simple-T Fast Vector突变掉pGM-T Vector的多克隆位点，以方便自行引入酶切位点。

试剂盒中配备了新型的RapiLigation Mix（目录号：RT407）为高效的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。按不同需要配备了DH5感受态细胞以及对照用超螺旋质粒，方便进行转化。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入（白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆，具体筛选原理参考分子克隆等书籍）。克隆后，可使用通用引物T7、SP6进行鉴定和测序。

产品特点

高效快速： 5 min快速连接，阳性率近100%。

灵敏广泛：适合低至0.025 pmol浓度片段和长至8 kb片段的高效连接。

无多克隆位点： 载体自身无多克隆位点，方便自行引入酶切位点。

原厂资料：

pGM-T Fast Vector 是基于pGM-T Vector改良的一种高效克隆PCR产物的专用载体，经由克隆质粒在XcmI内切酶酶切后得到的带3’ T突出末端的线性化载体，通过该方法产生的带有3’ T突出末端的线性化载体效率远高于传统酶切加尾法。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pGM Simple -T Fast Vector 3’端的T互补连接。此外，pGM-Simple-T Fast Vector突变掉pGM-T Vector的多克隆位点，以方便自行引入酶切位点。

试剂盒中配备了新型的RapiLigation Mix（目录号：RT407）为高效的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。按不同需要配备了DH5感受态细胞以及对照用超螺旋质粒，方便进行转化。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入（白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆，具体筛选原理参考分子克隆等书籍）。克隆后，可使用通用引物T7、SP6进行鉴定和测序。

产品特点

高效快速： 5 min快速连接，阳性率近100%。

灵敏广泛：适合低至0.025 pmol浓度片段和长至8 kb片段的高效连接。

无多克隆位点： 载体自身无多克隆位点，方便自行引入酶切位点。

注意事项：

1. 连接使用的PCR片段3' 端应带有A末端，如果是使用pfu等高保真聚合酶扩增的不带A末端
的平末端片段，可选用pLB零背景快速克隆试剂盒（VT205/206）或pGM-T平末端连接试
剂盒（VT402）进行连接反应。
2. 转化过程中使用Control Insert DNA做对照是非常必要的，在实验出现问题时可以确定原
因。
3. 建议留下部分连接产物，在出现问题后能迅速的补救，减少不必要的重复实验。
4. 涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂
布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的
克隆较少，可通过离心（4000 rpm，2 min）后吸除部分培养液，留下适量的培养基悬浮
菌体后将其涂布于一个平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数
过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。