PCR、RT-PCR、qPCR、Real-Time PCR、RT-qPCR...你真的能区分开吗？

PCR，学名聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction)，心灵手巧的它能以织围巾的方式将DNA分子套牢。在织围巾（PCR）的过程中，将几个元素织样（模板）、起针（引物对）、毛线（dNTP）和针（Taq酶以及缓冲液体系）串起来，让DNA分子无处可逃。

原理：

1、在高温（94℃）时将织样拆解开（DNA双链解链），

2、将已经织好的起针与织样相匹配（退火将已合成的引物与单链模板相结合），按照织样（模板），沿着起针（引物）用毛衣针（Taq酶）将毛线（dNTP）一针针连接上去（72℃延伸扩增）。

3、通过对所有织样（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解链）及新的起针（引物）搭配（结合）、编织（Taq酶扩增）这样循环n次后，围巾的数量就以2的n次方（产物量就以2的n次方）增多了。

如此，狡猾的DNA分子就只能在不断重复的热变性—复性—延伸的过程中束手就擒了。

如果你正在进行常规PCR实验，那么Promega推出的：

GoTaq G2 Polymerase and Master Mixes（M7822、M7832）就很合适了，它是即用型预混液，仅需加入模板、引物即可进行反应；

操作简单，极大的节省了科研用户的时间！

 

 

RT-PCR（指反转录PCR）

原理：

作为PCR的一种变形反应，通常会先在逆转录酶的作用下将RNA逆转录为DNA，再通过PCR进行扩增；

而想要实验效率高，可以选择：

GoScript Reverse Transcription Systerm (A5000) 

它可在15min内高效的将RNA逆转录为DNA，仅需提供模板即可实验。

 

 

qPCR、Real-Time PCR、RT-qPCR；

前面介绍的方法只能定性不能定量。要论定量，在PCR领域中，qRCR (quantitative real-time PCR) 称第二，谁又敢称第一呢！

目前在科研界中将Real-Time PCR缩写为 qPCR，已成为一种约定俗成的事；

而RT-qPCR指的就是qPCR和RT-PCR的组合，即将RNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析。

 

 

那么究竟qPCR身负何等绝技，引得一众科研者如此看重呢？

其实相比于PCR的简单“围巾”织样，qPCR因天生自带光环（荧光染料嵌合法和荧光探针法），可将这件围巾瞬间美化为“荧光衣”，使得荧光与DNA产物数目成正比，且与DNA初始量有一定相关性。

探针法，荧光集团标记的探针

染料法，结合DNA双链的染料

关于水解探针法，GoTaq Real-Time qPCR and RT-qPCR Systems for Probe-Based Detection (A6101、A6102)可是专业的！

它是专门为采用水解探针方法进行定量PCR实验而设计并优化的系统；

探针完整时报告基团发射的荧光被淬灭基团吸收，仪器检测不到荧光，探针被切断后，报告基团与淬灭基团分离，报告基团的荧光被仪器检测到。

若要对RNA表达水平进行相对定量分析，可以选择：

Go Taq Probe 1-Step RT-qPCR Systerm (A6120) ,

该系统结合GoScript逆转录酶和GoTap探针法定量PCR预混液，采用一步法实时扩增进行逆转录-定量PCR反应。

若想要效率更高，荧光强度更强，可以选择：

GoTaq Real-Time qPCR and RT-qPCR Systems for Dye-Based Detection(A6001、A6002)，

该系统中新型荧光DNA结合染料与双链DNA结合后，对PCR抑制更小，PCR效率更高，荧光强度更强。

关于染料法，也有针对一步法定量分析RNA的试剂系统Go Taq 1-Step RT-qPCR Systerm (A6020)，它更适用于高通量样品检测。

因此只需通过机器收集荧光量就能知道DNA或RNA初始量。

 

 

关于PCR的介绍和讲解就这些啦！

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