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实验名称:融合蛋白质的分离、纯化和检测

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描述:

       使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源蛋白已越来越受欢迎,其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。在这种方式中,克隆的目的基因被引入某表达载体编码的高表达蛋白(载体蛋白)氨基末端的一段序列(载体序列)的3’末端。载体序列通常是大肠杆菌DNA的一段序列,也可以是任一可在大肠杆菌中高度表达的基因,它提供良好表达所必需的信号,而表达出的融合蛋白的N端含有由载体序列编码的片段。载体序列编码的可以是整个功能蛋白的一半甚至是整个蛋白,比如表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白。通过以融合蛋白的形式表达,可利用载体蛋白或多肽的特殊性质对目的蛋白进行分离和纯化。为了便于目的蛋白的纯化,目前常用作分离标签的载体蛋白有GST、六聚组氨酸肽(polyHis-6)、蛋白质A(protein A)和纤维素结合域(CBD)等。

       本实验利用已经构建好的表达载体,在IPTG的诱导下,实现GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖珠层析系统,对GST融合蛋白进行分离纯化,对其表达和纯化情况用SDS-PAGE凝胶电泳检测。

 



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