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实验名称:质粒DNA纯化(聚乙二醇沉淀法)低成本型

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描述:

      Treisman法被广泛用于碱裂解法制备的质粒DNA的纯化。首先将粗提质粒DNA用氯化锂处理沉淀大分子RNA,用RNA酶消化污染的小分子RNA。然后用含PEG的高盐溶液沉淀大的质粒DNA,使短的RNA和DNA片段留在上清中。沉淀下来的质粒DNA用酚:氯仿抽提及乙醇沉淀。

       这里介绍一种改了的Treisman法:用PEG和MgCl2溶液沉淀质粒DNA。

       PEG/ MgCl2 沉淀法与用柱层析和CsCl-溴化乙锭平衡离心纯化质粒DNA的主要区别在于:他不能有效分离带缺口的环状质粒和闭合的环状质粒。后两种方法用于纯化易产生缺口的特大质粒(>15kb)和用于生物物理测量的闭合环状质粒是首选。不过,用PEG/ MgCl2 沉淀法纯化的治理不仅可用于所有分子克隆中的酶学反应(包括DNA测序),还可用于高效转染哺乳动物细胞

 



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