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电穿孔法

     

          原理;电穿孔法的基本原理是细胞置于一个瞬时的高电场的环境中,此高电场的环境使得细胞膜的表面出现很多的小孔,这种条件下细胞膜对环境中的分子的渗透性大大增加,这样就可以将外源分子进入细胞。 运用这一技术,许多物质,包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法,电穿孔已被广泛用于各种细胞类型,包括细菌、酵母、植物和动物细胞;而且,它还能作为注射方法(称为电注射),把各种外源物质引入活细胞。

优点;操作方便,低毒性,高的转染效率,使用于广泛的细胞。

应用;导入标记基因,起到标记,指示作用;导入具体的功能基因进行研究;导入药物、蛋白、抗体等其他分子对细胞的结构和功能进行研究。

工作过程

• 在电击的过程中,细胞膜上出现穿孔,质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触,并细胞膜上电穿孔的区域形成一种可以移动的复合物。

• 再次电击后,质粒脱离复合物并扩散至细胞质内开始顺转;同时小部分质粒进入核内与染色体整合,开始稳染。

• 当外界的电场撤销后,细胞膜表面的小孔重新关闭,阻碍了外界分子的再次进入。

工程流程示意图;

 



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